芳香烃受体核易位蛋白2基因表达对HCCLM6细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨短发夹(sh)RNA-芳香烃受体核易位蛋白(ARNT)2i慢病毒表达载体对高转移肝癌细胞HCCLM6侵袭和迁移的影响.方法 以ARNT2为目的基因,化学合成4条干扰RNA,与经Mlu Ⅰ和Cla Ⅰ酶切后的pLVTHM载体连接过夜,筛选并鉴定阳性克隆.利用脂质体2000将shRNA-ARNT2i,pCMV-dR8.74,pMD2G共转染293T细胞,获得shRNA-ARNT2i慢病毒颗粒,进一步感染HCCLM6靶细胞,并分为转染shRNA-ARNT2i组、未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组.用荧光实时定量PCR和Western blot检测ARNT2基因的干扰效率.应用划痕和Boyden小室法观察ARNT2表达下调对HCCLM6侵袭和迁移能力的影响.用SPSS16.0统计软件对数据进行独立样本t检验和方差分析,其中多组资料两两比较采用LSD法.结果 荧光实时定量PCR检测转染shRNA-ARNT2i组,未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组3组ARNT2mRNA相对表达值分别为0.154±0.024、0.860±0.145、1.004±0.009,F=113.14,P<0.01,差异有统计学意义;Western blot显示转染shRNA-ARNT2i组ARNT2蛋白的表达量为16.45±1.6,转染阴性对照序列组ARNT2蛋白的表达量为4_4.56±2.07,两组比较,t=18.58,P<0.01,差异有统计学意义;转染shRNA-ARNT2i组细胞在划痕48 h后基本愈合,而转染阴性对照序列组和未转染的空白对照组划痕依然可见;转染shRNA-ARNT2i组穿膜细胞数为(13.25±1.04)个,而未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组的穿膜细胞数分别为(6.50±2.56)个、(6.75±2.05)个,F=29.645,P<0.01,差异有统计学意义.结论 shRNA-ARNT2i载体能显著下调HCCLM6细胞ARNT2基因和蛋白的表达,促进HCCLM6细胞的运动和侵袭.