胰岛素干预后脂肪干细胞旁分泌对人血管内皮细胞的作用

目的 了解胰岛素刺激后脂肪干细胞(ADSC)旁分泌因子的变化及其对人血管内皮细胞的作用.方法 (1)分离培养人ADSC,按照随机数字表法将细胞分为胰岛素刺激组(含终浓度1×10-7mol/L胰岛素的无血清DMEM培养液培养)和对照组(未加胰岛素的无血清DMEM培养液培养),每组6孔.3 d后收集ADSC培养上清液(ADSC-CM),ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)表达量.(2)分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),将细胞按照随机数字表法分为4组,均采用内皮细胞专用培养液培养:胰岛素刺激ADSC-CM组,培养液中加入经胰岛素刺激后的ADSC-CM;无刺激ADSC-CM组,培养液中含无胰岛素刺激的ADSC-CM;胰岛素组,培养液中加入终浓度为1×10-7mol/L的胰岛素;空白对照组,培养液中不添加刺激因素.3 d后噻唑蓝法测定HUVEC增殖情况,数据用吸光度值表示.(3)另取HUVEC同上分为4组,培养12 h时,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素双染色法测定细胞凋亡情况.(4)另取HUVEC同上分为4组后,体外细胞划痕法测定划痕后12、24、36、48 h时HUVEC迁移距离.对实验数据行t检验.结果 (1)胰岛素刺激组VEGF、HGF含量分别为(643±64)、(930±68)pg/mL,显著高于对照组的(287±47)、(577±84)pg/mL(t值分别为18.869、18.475,P值均小于0.05).(2)胰岛素刺激ADSC-CM组、无刺激ADSC-CM组吸光度值分别为0.847±0.042、0.798±0.022,均高于胰岛素组的0.665±0.028(t值分别为4.579、3.732,P值均小于0.01)及空白对照组的0.674±0.031(t值分别为3.761、4.073,P值均小于0.01);胰岛素刺激ADSC-CM组吸光度值较无刺激ADSC-CM组明显增高(t=2.576,P＜0.05).(3)胰岛素刺激ADSC-CM组、无刺激ADSC-CM组细胞凋亡率分别为(5.8±1.9)%、(9.0±2.0)%,均明显低于胰岛素组的(30.4±6.0)%(t值分别为12.891、10.417,P值均小于0.05)和空白对照组的(31.4±7.4)%(t值分别为11.474、9.783,P值均小于0.05);无刺激ADSC-CM组细胞凋亡率高于胰岛素刺激ADSC-CM组(t=8.548,P＜0.05).(4)划痕后36、48 h时,胰岛素刺激ADSC-CM组、无刺激ADSC-CM组HUVEC迁移距离明显长于胰岛素组与空白对照组,且胰岛素刺激ADSC-CM组细胞迁移距离大于无刺激ADSC-CM组(t值分别为4.076、4.573,P值均小于0.05).结论 胰岛素干预后ADSC旁分泌能更有效促进人血管内皮细胞增殖、迁移并抑制其凋亡,有利于组织血管化.