海南坡鹿CDC42 cDNA的克隆、原核表达及纯化

Wei ZHANG,Pinlin CHEN,Ming LEI,Ying CHENG,Huan CHEN,Xianying CAO,Li DU,Donglin ZHANG,Tao LIU,Shiying XU,Yunnan FU,Chao QI,Fengyang WANG

Acta Theriologica Sinica（2011）

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摘要

应用RT-PCR方法对海南坡鹿细胞分裂周期蛋白42(Cell division cycle 42,CDC42)编码区进行扩增,将扩增产物与PET-42a载体连接,重组质粒鉴定正确后,进行生物信息学分析;构建pET42a-hdCDc42表达载体,经IPTG诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE、可溶性分析、纯化及Western blot分析.结果表明,海南坡鹿CDC42含有1个576 bp的开放阅读框,编码191个氨基酸.经IPTG诱导表达后,得到一个带有His-tag和GST的约54 kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约54 kD的特异性抗体结合带,表明海南坡鹿CDC42原核表达载体成功构建并表达.

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关键词

CDC42,Cloning,Expression,Hainan eld's deer ( cervus eldi hainanus ),Purification

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