鼠TNF家族的B细胞活化因子ORF基因的克隆及原核表达

目的 克隆鼠TNF家族的B细胞活化因子(B cell activating factor of TNF family,BAFF)ORF基因,并进行原核表达及纯化.方法 提取鼠新鲜脾脏组织总RNA,经RT-PCR扩增BAFF ORF基因,测序后,克隆入载体pMAL-c2x,构建重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF,转化大肠杆菌Rosseta(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析纯化后,进行Western blot分析.结果 RT-PCR扩增得到约930 bp的cDNA,其序列与GenBank中登录的鼠BAFF ORF cDNA序列的同源性达99.9%;重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF经酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为76 500,IPTG终浓度为0.9 mmol/L,诱导时间为4 h,目的 蛋白的表达量最高,破菌上清和沉淀中均可见目的 蛋白条带,可溶性蛋白的表达量占全菌总蛋白的49%;纯化的重组蛋白纯度可达90%,含量为0.9 mg/ml,且具有良好的反应原性.结论 已成功克隆了鼠BAFF ORF基因,并进行了原核表达及纯化,为进一步研究其生物功能奠定了基础.