不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6的纯化及其免疫原性

目的 纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)外膜蛋白P6,并检测其免疫原性.方法 常规培养NTHi,根据外膜蛋白P6的特性纯化P6蛋白.Lowry法测定纯化P6蛋白的含量;SDS-PAGE检测纯化P6蛋白的相对分子质量及纯度;IEF-PAGE分析纯化P6蛋白的等电点;琼脂糖双向免疫扩散试验鉴定纯化P6蛋白;以纯化的P6蛋白免疫NIH小鼠,ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体水平,并进行小鼠保护性试验.结果 纯化的P6蛋白含量为208μg/ml;相对分子质量为16 600,纯度为100%;等电点为5.49;琼脂糖双向免疫扩散试验证实所提取的蛋白为P6蛋白;ELISA检测显示,P6蛋白具有良好的免疫原性,免疫小鼠后能够诱导产生针对P6蛋白的抗体,其抗体水平呈剂量依赖关系,最佳免疫剂量为10μg/只,最佳免疫针次为3针;对20 LD50 NTHi SSI p/1225株攻击的小鼠保护率为80%.结论 已纯化了不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6,其具有良好的免疫原性和保护效果.