牛布鲁菌L7/L12蛋白的原核表达及纯化

目的 原核表达并纯化牛布鲁菌L7/L12蛋白.方法 提取牛布鲁菌S19基因组DNA,PCR法扩增L7/L12基因,经测序正确后,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-L7/L12,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.SDS-PAGE分析目的 蛋白的表达形式及表达量,经亲和层析纯化后,Western blot鉴定纯化产物.结果 所构建的重组原核表达质粒pET-L7/L12经酶切鉴定表明构建正确.重组蛋白以包涵体形式表达,表达量占全菌总蛋白的33%;纯化的重组蛋白纯度可达94%,可与布鲁菌小鼠免疫血清发生特异反应.结论 已成功表达并纯化了牛布鲁菌L7/L12蛋白,为建立高特异性的新型布鲁菌检测方法奠定了基础.