XAF1基因在肝癌细胞凋亡中的诱导作用

背景:X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)与凋亡抑制和肿瘤细胞耐药现象密切相关.目的:研究XIAP相关因子1(XAF1)基因抑制人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2增殖和诱导凋亡的作用.方法:以腺病毒Ad5/F35为载体,构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照空病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白(EGFP),分别以相同感染复数(MOI)感染人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2,并设立空白组作为对照.作用48 h后,以荧光显微镜检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测XAF1 mRNA和蛋白表达;以MTT法检测细胞活力;以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率.结果:Ad5/F35-EGFP感染48 h后,几乎所有Bel-7404和HepG2细胞均表达EGFP.Ad5/F35-XAF1感染48 h后,两种肝癌细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达均明显增高,细胞活力呈剂量依赖性地降低,细胞凋亡率显著增加.结论:重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2中的感染效率高,XAF1在不同的肝癌细胞株中恢复表达后,能显著抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,有可能成为肝癌基因治疗的新靶点.