乙型肝炎病毒458 nt～1308 nt剪接特异性蛋白抗α-干扰素作用

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)458 nt～1308nt剪接特异性蛋白TSR'r'(源于HBVDNA聚合酶读码框,T代表TP区,S为Spacer区,R'为截短的RT区,r'为截短的RNaseH区)抗α-干扰素(IFN-α)作用并分析其功能区域.方法 PCR扩增获得HBV 458 nt～1308 nt剪接变异体剪接特异性基因TSR'r'及其缺失突变体,并克隆于pcDNA3.1/HisC.重组载体以FuGENE6转染Huh7肝细胞,通过融合表达的多肽表位抗体,Western blot检测目的蛋白表达.TSR'r'及其缺失突变体重组载体分别与IFN-α反应报告载体p6-16CAT共转染Huh7肝细胞,转染后48h给予终浓度为100 IU/ml的IFN-α2a刺激,作用24 h后裂解细胞,检测胞内氯霉素乙酰基转移酶(CAT)含量.所有实验数据采用单因素方差分析法进行统计分析.结果 构建TSR'r'及其缺失突变体重组真核表达载体,Westernblot显示各基因片段在Huh7细胞中均表达相应蛋白.p6-16CAT共转染结果显示,随着TSR'r'重组表达载体转染量的递增,Huh7胞内CAT值逐渐降低.此外,转染TP+Spacer区的缺失突变体可导致Huh7胞内CAT值显著下降,而其他各类TSR'r'缺失突变体共转染后胞内CAT值无变化.结论 HBV 458 nt-1308 nt剪接特异性蛋白抑制Huh7细胞对IFN-α仅的反应性,其活性与N端的TP及Spacer区有关.