RNA干扰技术沉默Smad4基因表达对ECV304细胞增殖和迁移的影响

Yang CAO,Xiao-yuan HUANG,Ouan-fu MA,Yang YANG,Liang ZHUANG,Ding MA,Jian-feng ZHOU

Tumor（2008）

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摘要

目的:探讨利用RNA干扰技术下调Smad 4基因表达对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响,初步了解Smad 4在血管生成中的作用.方法:设计并合成靶向人Smad 4基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段siRNA1和siRNA2,脂质体介导转染入人脐静脉内皮细胞株ECV304.应用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测转染前后Smad4基因表达水平;应用细胞周期分析和羧乙基锗倍半氧化物(6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)-流式细胞仪检测ECV304细胞转染前后细胞增殖能力的变化;通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化.结果:从2条siRNA中成功筛选出1条siRNA,干RNA和蛋白水平可明显下调Smad4基因的表达;ECV304细胞转染Smad4的siRNA后,细胞的增殖和迁移能力明显增强.结论:利用RNA干扰技术能够筛选出高效的特异阻断Smad 4基因表达的siRNA;Smad 4基因表达下调能够明显促进血管内皮细胞的增殖和迁移.

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关键词

Cell proliferation,Cell, ECV304,Gene expression,Gene, Smad4,Neoplasms, experiment,RNA interference

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