中试规模高效纯化重组人核苷二磷酸激酶A

中试规模纯化重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A).菌体高压匀浆,然后微滤去除菌体碎片.超滤浓缩,所得样品上样DEAE-sepharose Fast Flow,收集目的峰,上样Cibacron Blue 3GA Sepharose CL4B,含ATP的缓冲液洗脱目的蛋白,超滤精制.结果表明,1500g菌体经过2次匀浆后,所得匀浆液中舍NDPK 47.6g,经过微滤超滤处理后,可回收目的蛋白27.3g.再经过两步柱层析及超滤精制后,最终可得纯度为96.3%的目的蛋白17.2g,总回收率为36.2%,每100 g湿菌体的蛋白产率为1.15g.比较每个步骤的回收率,发现精制＞亲和层析＞离子交换层析＞样品前处理过程.与前期报道发酵工艺联用,rhNDPK-A的纯化产量达到510mg/L.工艺简便、得率高的rhNDPK-A纯化工艺的建立为NDPK的应用开发提供了物质基础;另外,本文结果也提示.对于非分泌型重组蛋白来说,影响目的蛋白回收的最主要因素可能不是柱层析,而是样品前处理过程.