用同源重组法构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库的探索

Fudan University Journal of Medical Sciences(2007)

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摘要
目的 探索卵巢成熟及明确早胚发育过程中,构建小鼠卵母细胞cDNA文库筛选所涉及的相互作用蛋白.方法 利用SMART技术,构建酵母双杂交筛选卵母细胞中与输卵管蛋白相互作用的靶分子成分为目的,构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库.采用Stratagene RNA prepkit抽提500枚卵母细胞总RNA,应用线性化载体pGADT7-Rec在体构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库.结果 文库的滴度为3.7×106,重组片段大小主要集中在0.6-0.9 kb,重组率为60%.结论 所构建的小鼠卵母细胞cDNA文库可用于酵母双杂交筛选.
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关键词
cDNA library,Homologous recombination,Mouse oocyte,Yeast-2-hybrid
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