survivin的siRNA靶向干扰膀胱癌的实验研究

目的 实验研究靶向转染survivin的小分子干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对膀胱癌生物学行为的影响.方法 设计1对survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体转染T24膀胱癌细胞株.采用流式细胞术检测转染效率和细胞凋亡;荧光实时定量PCR检测干扰前后survivin的mRNA表达;用survivin的siRNA片段插入空载体后建立重组载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin.结果 脂质体转染T24细胞后的转染效率为92.3%;survivin编码基因序列特异的siRNA能有效下调survivin基因的表达,呈时间和剂量依赖性,最大效应浓度为100 nmol/L,此时survivin表达水平下调了75.91%,并显著地抑制了细胞生长,抑制率达55.29%,差异有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡率亦增至45.70%,与对照相比差异有统计学意义(P＜0.01).用限制性内切酶将空载体线性化,T4 DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中,对该重组表达载体进行鉴定,获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin.结论 siRNA-survivin能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,可能成为膀胱癌基因治疗的新工具.成功构建的靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体为进一步应用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础.