C6细胞中诱导体外培养大鼠神经干细胞迁移蛋白的初步分析

目的:许多体内实验表明神经干细胞具有向胶质瘤细胞迁移的特性,该特性使神经干细胞有可能成为基因治疗脑胶质瘤潜在的基因携带者.实验拟观察大鼠星形胶质瘤C6细胞诱导体外培养的大鼠神经干细胞的迁移作用,并初步分离C6细胞中诱导神经干细胞迁移的蛋白.方法:实验于2005-01/2006-05在南通大学江苏省神经再生重点实验室完成.实验材料:C6细胞用含10%小牛血清的DMEM/F12培养基进行培养,使用时细胞处于对数生长期.清洁级的新生1周内的SD大鼠由南通大学实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.实验方法:从新生5～7 d SD大鼠大脑皮质分离培养、纯化神经干细胞.从SD新生红皮鼠大脑皮质分离、培养、纯化星形胶质细胞.采用"Transwell Inserts"细胞培养室培养系统共培养36 h,比较C6细胞和大鼠星形胶质细胞对体外培养的大鼠神经干细胞的迁移作用;自然系统聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳分离C6细胞和星形胶质细胞差异蛋白,观察各蛋白凝胶条带对神经干细胞的迁移作用.结果:体外培养C6细胞能诱导神经干细胞迁移,迁移细胞数目与星形胶质细胞相比,差异有显著意义(P＜0.001).将C6细胞中差异蛋白条带与神经干细胞共培养,与对应的星形胶质细胞蛋白条带相比,可观察到与相对分子质量约67 000蛋白胶条共培养的神经细胞球在接近蛋白胶条的一侧细胞向胶条迁移生长.结论:C6细胞可以诱导体外培养的神经干细胞迁移,其总蛋白在自然系统聚丙烯酰胺凝胶电泳分离实验中获得的相对分子质量为67 000的蛋白组分具有诱导神经干细胞迁移的活性.