双剪接型2.2kb乙型肝炎病毒基因组剪接变异体编码蛋白的反式激活作用

目的 研究双剪接型2.2kb乙型肝炎病毒(HBV)剪接变异体编码的新蛋白的功能.方法 PCR扩增双剪接型2.2kbHBV剪接特异性新基因并克隆于哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/HisC.以FuGENE6将此重组载体(pcDNA3.1/HisC-TPds)转染Huh7细胞,采用融合表达的多肽表位(X-press表位)抗体,通过Western blot检测目的蛋白在不同时间段的表达.pcDNA3.1/HisC-TPds分别与β-半乳糖苷酶报告载体pSV-β-glactosidase(含SV40启动子/增强子)或pCMVβ(含CMV即刻早期启动子)共转染Huh7细胞,转染后48h裂解细胞并检测胞内β-半乳糖苷酶活性,实验数据以SPSS11.5软件分析.结果 克隆420bp双剪接型2.2kb HBV剪接变异体新基因,Western blot显示其在Huh7细胞中表达相应蛋白,以转染后48h为最高.在含有CMV即刻早期启动子或SV40启动子/增强子的报告载体与pcDNA3.1/HisC-TPds质量比为1:10～1:50范围内,共转染有报告载体及pcDNA3.1/HisC-TPds的Huh7细胞内β-半乳糖苷酶活性均大于相应的pcDNA3.1/HisC空白载体对照组,且在1:10～1:40范围内存在剂量-效应关系.结论 双剪接型2.2kb HBV剪接变异体编码的新蛋白可反式激活CMV即刻早期启动子及SV40启动子/增强子,提示其可能与HBV致病有关.