不同发育阶段小鼠纹状体神经干细胞的体外增殖和分化情况比较

目的:分析胚胎、新生以及成年小鼠纹状体神经干细胞的体外培养和分化条件,并比较其体外增殖和分化情况. 方法:实验于2005-02/05在解放军第四军医大学西京医院神经内科实验室完成.选取孕14 d小鼠、出生24 h内的新生小鼠和4月龄的成年小鼠各1只用于实验.①神经干细胞的原代培养:分别将孕14 d小鼠、新生小鼠和成年小鼠处死后取出纹状体组织,轻轻吹打制成单个细胞悬液,接种于无血清的D/F12培养基中,每六七天机械分离克隆传代1次.②神经干细胞的鉴定:采用有限稀释法获得神经干细胞单克隆,继续培养得到大量来自单个细胞的亚克隆.对神经球行免疫荧光染色鉴定.③通过四甲基偶氮唑盐比色法及免疫荧光染色比较胚胎鼠、新生鼠及成年小鼠的神经干细胞的增殖和分化情况.结果:①成功地从胚胎鼠、新生鼠以及成年小鼠的纹状体中分离培养出神经干细胞.②胚胎鼠、新生鼠及成年小鼠的神经干细胞分化为神经元的比例均为7%～11%,分化为星形胶质细胞的比例均为76%～88%,差异无显著性意义(P＞0.01).③与成年小鼠比较,胚胎鼠和新生鼠的神经干细胞增殖旺盛(P＜0.01),而胚胎鼠和新生鼠之间差异无显著性意义.结论:随着小鼠年龄的增加纹状体神经干细胞的增殖能力逐渐减弱,但仍保持着分化为神经元和胶质子细胞的能力.胚胎和新生鼠源性的神经干细胞均具有较强的增殖能力,为寻找理想的移植细胞提供了思路.