人TEM7膜外段单克隆抗体的制备及其在不同来源肿瘤组织中的定位研究

目的利用制备的抗人肿瘤血管内皮标志物-7(TEM7)单克隆抗体通过免疫组织化学的方法,检测TEM7蛋白在不同来源的肿瘤组织中的定位,为以TEM7为靶标的肿瘤血管导向治疗提供必要的理论基础. 方法利用PCR的方法,将TEM7膜外段重组到原核表达载体pET-32b中,在大肠杆菌中表达,蛋白经离子吸附层析纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,传统的杂交瘤融合技术制备鼠抗人TEM7膜外段单克隆抗体.以酶联免疫吸附实验(ELISA)、Western blot筛选及鉴定分泌特异性抗人TEM7膜外段单克隆抗体的杂交瘤细胞株. 最后采用免疫组织化学ABC的方法,分别对不同来源的70例肿瘤组织及癌旁正常组织进行了TEM7蛋白定位的研究. 结果制备了抗人TEM7单克隆抗体,经过Western blot鉴定具有高度的特异性.对肿瘤及癌旁正常组织免疫组织化学ABC染色的结果可见TEM7蛋白定位于:大肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、肝细胞癌、肾细胞癌和前列腺癌的血管内皮细胞;大肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌和肝细胞癌的肿瘤细胞;大肠癌、胃癌和乳腺癌的血管平滑肌细胞;胃癌的胃壁平滑肌细胞;肝细胞癌的胆管上皮细胞. 结论成功制备了特异性抗人TEM7膜外段的单克隆抗体;TEM7在肿瘤组织中并非特异性地表达于肿瘤血管内皮细胞,还可见于肿瘤组织的癌细胞、血管平滑肌细胞中,甚至在正常组织中也有表达.提示,在寻找以肿瘤血管内皮细胞为靶标的标志物时,直接寻找蛋白标志物可能是更为有效、可靠的方法.