人ECK基因外显子3的实验研究

目的建立人eck基因外显子3(exon-3)的克隆与鉴定方法,研究其在ZR-75-1细胞系中的突变情况.方法设计一对eck基因exon-3特异性引物,提取人正常皮肤组织和乳腺癌细胞系ZR-75-1基因组DNA,并以此作为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增eck基因exon-3片段,克隆入中介载体pUCm-T中构建重组质粒,转化JM109大肠杆菌,扩增后经酶切、PCR初步鉴定后,进行序列分析.结果①从正常皮肤组织上皮细胞、ZR-75-1细胞系基因组DNA中,经PCR扩增,获得了人eck基因exon-3片段;②建立了正常皮肤组织、ZR-75-1细胞系eck基因exon-3片段的克隆;③ZR-75-1细胞系中eck基因exon-3片段存在突变.结论从人组织与细胞系基因组DNA中,成功地构建了人类eck基因exon-3的克隆,并证实eck基因exon-3在ZR-75-1乳腺癌细胞系中有突变,为进一步研究eck基因exon-3在肿瘤形成中的作用奠定了基础.