LY294002对人晶状体上皮细胞蛋白激酶B活化的影响

背景 蛋白激酶B(Akt)与许多细胞信号转导通路密切相关,从而参与多种细胞功能活动的调控,包括细胞的增生、迁移和代谢等,其中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)可催化Akt活性并启动各种相关的细胞信号通路.PI3K抑制剂能够抑制Akt活性,但是否影响后发性白内障发生过程中残留的晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为尚不清楚. 目的 观察PI3K抑制剂LY294002对人LECs中Akt活化的影响. 方法 对人LECs系HLEC-B3细胞进行常规培养和传代,然后接种于96孔板中,培养24 h后在培养板中加入LY294002,终浓度分别为0、10、20、30、40、50、60、70、80 μmol/L,继续培养24 h后采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞的增生抑制率.在同一批接种于6孔板内无菌盖玻片上的传代细胞中加入10μg/L转化生长因子-β2(TGF-β2)为诱导组,用20 μmol/L LY294002预培养1h后再加入10 μg/L TGF-β2进行共培养为TGF-β2与LY294005共培养组,以未加入TGF-β2和LY294002的细胞作为对照组,应用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞中磷酸化Akt(p-Akt)的荧光表达情况,并用Western blot法检测各组细胞中p-Akt表达量的差异.结果 CCK-8法检测结果显示,随着LY294002浓度的增加,HLEC-B3的吸光度(A)值逐渐减小,即LY294002对HLEC-B3细胞增生的抑制作用随浓度的增加而逐渐增强,不同浓度LY294002组间HLEC-B3的A值比较差异有统计学意义(F分组=9.72,P=0.00)；随着检测时间点的延长,HLEC-B3的A值逐渐增大,不同检测时间点A值比较差异有统计学意义(F时间=1737.54,P=0.00).激光扫描共焦显微镜观察显示,对照组细胞仅有微量的p-Akt红色荧光,诱导组p-Akt表达明显增多,并向细胞膜聚集,细胞轮廓清晰,而TGF-β2与LY294005共培养组细胞中p-Akt表达的红色荧光明显减弱,细胞形态不清.Westernblot法检测结果显示,对照组、诱导组和TGF-β2与LY294005共培养组细胞中p-Akt的表达量分别为0.91 ±0.08、1.48±0.13和0.95±0.19,3个组间差异有统计学意义(F=15.04,P=0.00).结论 LY294002能够拮抗TGF-β2诱导的Akt磷酸化激活过程,有望成为新的有效防治后发性白内障的药物.