表面等离子共振技术结合滚环扩增法检测丙型肝炎病毒

目的 研究滚环扩增(RCA)技术结合特异性表面等离子共振(SPR)金膜芯片检测丙型肝炎病毒(HCv)的方法.方法 根据丙型肝炎x-tail区域的特异检测序列,设计并合成针对RCA法检测HCV的探针和引物,分成3组(实验组、阴性样品组和阳性样品组)进行RCA实验,验证RCA法检测HCV的特异性.将模板浓度按10倍梯度稀释,评价SPR技术结合RCA法检测的检测限.在普通金膜芯片的基础上进行表面化学处理,形成高特异性核酸芯片,用抗蛋白实验验证芯片抗蛋白能力.采用双通道SPR仪对RCA反应及信号放大反应进行实时观测.运用SPR技术结合RCA法检测63例临床血液样品,并与Real-Time PCR法比较,评价其灵敏度和特异度.结果 SPR技术结合RCA法对HCV阳性标准品的最低检测浓度为1 pmol/L,低于Real-Time PCR法的检测限(0.1 nmol/L).SPR芯片具备良好的抗蛋白质非特异性吸附能力.双通道SPR仪对RCA芯片系统的检测信噪比为100,实现了对HCV的检测.对临床样品的检测灵敏度为90.0％( 27/30),特异度为84.8％( 28/33)(x2=8.10,P=0.004).结论 SPR技术结合RCA法将生物传感技术及原位扩增技术相结合,实现了快速、非标记和实时检测HCV.