CRELD1基因过表达对心脏瓣膜相关基质蛋白的影响

目的 探讨CRELD1基因过表达对心脏瓣膜相关基质蛋白的影响.方法 采用PCR技术获得CRELD1基因,利用质粒pcDNA3.1(一)构建目的基因的真核表达载体,酶切及DNA测序鉴定.利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染人胚肺成纤维细胞株(HFL-I)(重组质粒组),以空载体转染细胞和未转染细胞分别作为转染对照组和空白对照组.采用Real-TimePCR技术和Western blotting方法检测细胞中心脏瓣膜基质蛋白Tenascin-C和Aggrecan的mRNA和蛋白相对表达量.结果 重组质粒测序鉴定结果与GenBank数据库比对序列一致.重组质粒组HFL-I中Aggrecan的mRNA和蛋白相对表达量均显著低于转染对照组和空白对照组(P＜0.05);各组HFL-I中Tenascin-C的mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CRELD1基因过表达时可以下调人胚肺成纤维细胞中心脏瓣膜基质蛋白Aggrecan的表达量,为阐明CRELD1基因在房室间隔缺损中的作用提供了一定的理论基础.