串联siRNA干扰沉默结肠癌SW480细胞APRIL基因表达

目的 检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体(APRIL)基因的影响.方法 设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段(sh644、sh1451、sh1938、sh2231),分别将其连接至pGenesil-1.1质粒表达载体,形成pGsh644、pGsh1451、pGsh1938、pGsh2231单一表达载体,同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联siRNA表达载体.阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480.实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SW480细胞中APRIL mRNA和蛋白表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,构建的串联siRNA质粒载体符合要求.几条siRNA均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达,APRIL mRNA的抑制率分别是pGsh644(56.2％)、pGsh1451(49.5％)、pGsh1938 (50.9％)、pGsh2231 (49.2％)、pG4(79.3％).蛋白质表达抑制率分别为pGsh644(56.9％)、pGsh1451(48.7％)、pGsh1938(50.1％)、pGsh2231 (46.4％)、pG4 (87.5％) (P＜0.05).其中以pG4抑制效应最强.结论 与传统单一的siRNA表达载体相比,串联siRNA表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达,为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础.