3copy C基因型HBV转基因小鼠的制备

目的制备C型HBV转基因小鼠,为乙肝的防治研究工作提供较好的动物模型。方法采用受精卵显微注射法,制备HBV转基因小鼠,用PCR,ELISA,荧光定量PCR和免疫组化的方法检测HBV基因在转基因小鼠体内的整合、复制和表达情况。结果注射受精卵2282枚,筛选注射后成活的受精卵共2024枚,注射成活率88.7%。注射后受精卵共移植假孕雌鼠72只,其中有59只怀孕,假孕雌鼠妊娠率82%,共产下F0代小鼠185只,PCR检测共有19只小鼠阳性,PCR阳性率为10.3%,荧光定量PCR血清HBV DNA显示6只小鼠有复制,其拷贝数为102～103copies/L之间;经传代产下F1代小鼠96只,PCR检测HBV DNA阳性33只,PCR阳性率为34.4%,荧光定量PCR血清HBV DNA显示10只小鼠有复制;随机分别取3只F0代和F1代小鼠的肝脏和肾脏HBsAg免疫组化均为阳性。结论制备的C型HBV转基因小鼠在体内有复制和表达,并且可以遗传给下一代。