重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)及其突变体的纯化
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY（2003）
摘要
稳定高效表达重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)的CHO细胞株和表达组合突变体的细胞株进行了3L转瓶培养.将培养上清分别进行了Lys-Sepharose 4B亲和层析和Zn2+-Sepharose 4B层析两步纯化,rht-PA纯度提高了534倍,比活达2.5×105 IU/mg,产率为73%;突变体纯度提高了1119倍,比活达5.9×105 IU/mg,产率为69%.纯化产物SDS-PAGE分析显示,rht-PA和突变体基本都呈单一条带,扫描分析均达到98%以上纯度.rht-PA和突变体在纯化系统中的行为作对照分析发现,突变体的构建思想在Lys-Sepharose 4B亲和层析过程中有充分体现.这两步层析组合是很好的纯化t-PA及其突变体的方法,尤其是Lys-Sepharose 4B纯化突变体效果更好.
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