牛传染性鼻气管炎病毒DQ株gD基因表达及其间接ELISA方法的建立和初步应用

以原核表达的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gD蛋白作为包被抗原,建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。构建pET30a-gD重组质粒,在大肠杆菌中表达IBRV重组gD蛋白,Western-blot检测该重组蛋白具有良好的免疫活性。通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为2.5μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶200,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶5 000,与病毒中和试验、全病毒ELISA方法的检测结果符合率分别为87.5%、92.5%。用该法对黑龙江部分地区采集到的863份牛血清样品进行检测,结果阳性率为82.27%。本试验建立的间接ELISA方法可用于IBR的检测和流行病学调查。