巢式实时荧光定量PCR检测RA患者外周血单个核细胞TGF-βR Ⅱ mRNA

目的 建立检测人外周血单个核细胞(PBMc)中转化生长因子βⅡ型受体(TCF-β RⅡ)mRNA实时荧光定量PCR方法,并探讨其在RA中的临床意义.方法 跨内含子设计外引物,并根据扩增片段,设计一对内引物,采用巢式实时荧光定量PCR(nestecl-reall-time-PcR)方法.首次扩增采用减少引物、酶浓度、及循环次数的方法保持扩增片段的高度特异性,再进行第二次PCR扩增作实时荧光定量检测,同时以β-actin作内参,二者比值作为TGF-βRⅡ表达水平指标.结果 Ct值和模板起始浓度对数值之间具有良好的线性关系(r2=0.999);检测最低浓度可达101拷贝.RA患者组和健康对照组的TGF-βRⅡ与β-actin的比值分别为0.45±0.11和0.37±0.10,两者有显著差异(P<0.01);RA治疗前、后两者比值分别为0.46±0.11和0.40±0.11,治疗后下降13.0%.结论 巢式实时灾光定量PCR检测PBMC中TCF-βRⅡmRNA的方法简便,特异,重复性好,可信度高,其表达水平对RA具有一定的诊断价值,并可作为评价该病治疗效果的一种方法.