犬粪便棘球绦虫抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用

目的 研究双抗体夹心酶联免疫吸附检测犬粪便棘球绦虫虫体抗原的方法并评价其在实际工作中的应用价值.方法 实验犬12只,分实验组和对照组,实验组用活化绵羊源原头蚴(G1型)作人工感染;感染后08周内收集粪便,56 d宰杀实验犬,收集成虫;制备成虫抗原和虫体代谢/分泌抗原,蛋白酶K处理抗原并分别免疫成年绵羊和新西兰白兔;绵羊抗血清用80%饱和硫酸铵沉淀、透析,兔抗血清过IgG亲和层析柱,分别获得纯化抗体;观察犬粪便在PBS液中-80 ℃冷冻3 d或在含1% Formalin 的PBS液中70 ℃80 ℃加热8 h的处理方法对检出结果的影响.运用该方法对四川省甘孜县达通玛区4个乡的580只家犬吡喹酮每6月一次驱虫前后的粪抗原进行监测.结果 试验系统的敏感性为92.3%,特异性为80%;粪抗原从感染后的第23周可检出;两种样品处理方法都可以灭活虫卵但不影响检出效果;检测方法可同时用于对细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染的诊断;达通玛区家犬粪抗原阳性率从2000年的50%下降到2005年的17%.结论 检测方法具有较高的特异性和敏感性;推荐粪便用加热的方法处理可以灭活虫卵以防止生物污染;该方法可以在基层推广应用.