金黄色葡萄球菌isdB基因克隆、表达及其抗原性鉴定

为了构建含牛源金黄色葡萄球菌isdB基因的原核表达载体,并确定其在大肠杆菌表达系统中的表达效果,应用PCR方法扩增出isdB基因片段与原核表达载体pQE-30,构建了重组原核表达载体pQE-30-isdB,将该重组载体转化至E.coliXL1-Blue中诱导表达蛋白。经SDS-PAGE和Western blot鉴定,PCR扩增出约1 938 bp的基因片段,测序结果与GenBank上发表的MW2株核苷酸和氨基酸序列的一致性均为98.6%;成功表达出约72 ku的蛋白,与IsdB蛋白的相对分子质量大小一致;Western blot分析表明,该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性。本次试验成功构建了IsdB蛋白的原核表达系统。