分子信标检测限制性内切酶活性的新型荧光分析方法

Life Science Research(2009)

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摘要
利用分子信标被切割后荧光信号的变化,发展了一种简便的检测限制性内切酶活性的新型荧光分析方法.以限制性内切酶XspⅠ为例,将其识别位点嵌入具有茎环结构的分子信标探针(Molecular Beacon,MB)的环状部分,利用这种分子信标在溶液中形成的瞬时二聚体结构,实现了限制性内切酶对分子信标的切割.在优化的条件下,反应初速度与酶的浓度成正比,线性范围为0.05~50U/mL,检测限为0.05U/mL.通过改变分子信标环部的识别位点的序列,还可以检测其他限制性内切酶如AluⅠ的活性.
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关键词
restriction endonucleases,molecular beacon,fluorescence assay
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