在毕赤酵母中利用口蹄疫病毒(FMDV)2A实现dTomato和串联Magainin Ⅱ基因的共表达
Journal of Agricultural Biotechnology(2012)
摘要
抗菌肽(antibacterial peptides)是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的多肽,是天然免疫的重要组成部分。为了提高抗菌肽的表达量以及很方便地检测抗菌肽的表达情况,本研究利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)2A将荧光蛋白dTomato基因和3个串联的MagaininⅡ基因融合到一个开放阅读框中(open reading frame,ORF),融合的基因被置于pPIC9K载体醇氧化酶基因(AOX1)启动子的下游,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC9K-dTomato-2A-3M,将线性化的重组酵母表达载体通过电击法转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,经G418筛选和PCR鉴定得到阳性转化子,然后将其转至摇瓶,在30℃、0.5%甲醇的条件下进行诱导表达,连续诱导3d。SDS-PAGE电泳图谱显示,在31kD(dTomato)和9.5kD(3M)处有蛋白条带出现,在荧光显微镜下观察酵母表达上清发出红色荧光,对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抑菌试验结果表明,重组抗菌肽串联的Magainin Ⅱ具有明显的抑菌效果。结果表明,由2A连接的融合基因(荧光蛋白dTomato和串联的Magainin Ⅱ)在毕赤酵母中成功的进行了表达,FMDV2A在其C端剪切多聚蛋白,得到dTomato和串联的Magainin Ⅱ两个独立而有活性的蛋白,为小分子抗菌肽的表达提供一个高效的检测方法。
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关键词
Coexpression,MagaininⅡ,Foot-and mouth disease virus(FMDV) 2A,Antibacterial peptide
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