新城疫病毒class Ⅰ和class Ⅱ微型基因组的构建及其复制效率差异性的比较

为研究新城疫病毒(NDV)微型基因组的复制效率,本实验分别以NDV 9a5b(Class Ⅰ)病毒株和La Sota(Class Ⅱ)病毒株基因组骨架为平台,插入绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因替代病毒的整个编码区,只保留与病毒复制、转录和病毒包装相关的调控区域Leader和Trailer,构建获得的微型基因组DNA片段反向插入反向遗传载体TVT(0.0)中,从而构建了两株病毒的微型基因组质粒.同时,将相应病毒株的NP、P和L3个基因分别克隆至pCI-neo载体中,构建3个辅助质粒的真核表达系统.通过将微型基因组和辅助质粒共转染BSR T7/5T7-5细胞,表明在相同转染条件下,无论使用哪一种辅助质粒,Class Ⅱ型微型基因组的报告基因的表达效率均高于Class Ⅰ型微型基因组.实验结果显示Class Ⅰ NDV转录复制系统的运行效率明显低于ClassⅡ NDV.