Rtn4-A/B基因敲除小鼠模型的制备

目的 通过制备Rtn4-A/B基因敲除小鼠,探索Rtn4-B基因的生物学功能.方法 用细菌人工染色体(BAC)载体构建Rtn4-A/B基因打靶载体并使其线性化,通过电转化法将其转入129SvEv品系雄性小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞).将正确同源重组的ES细胞注射入C57BL/6J小鼠囊胚腔,繁育出嵌合体小鼠后,进一步繁殖以获得杂合子小鼠.抽提小鼠尾尖组织DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型.结果 基因打靶后,得到14个发生双臂正确同源重组ES细胞克隆.利用阳性ES细胞克隆进行囊胚内显微注射,得到5只嵌合率大于50％的雄鼠,最终繁育得到4只Rtn4-A+/-B+/-杂合子小鼠.结论 利用ES细胞基因打靶、同源重组等方法,成功获得Rtn4-A/B基因敲除杂合子小鼠.