褪黑素对脂多糖诱导血管内皮细胞损伤的保护机制研究

目的:研究褪黑素(melatonin,MLT)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用及其机制探讨。方法:不同浓度的褪黑素作用于体外培养的内皮细胞脂质过氧化损伤模型,实验分为5组,即正常对照组(Ctrl),脂多糖(LPS)氧化损伤组:在培养基中加入2mmol/L的LPS诱导损伤4 h;LPS加MLT低剂量(200μmol/L)组、中剂量(400μmol/L)组、高剂量(600μmol/L)组。采用MTT法观察MLT对HUVECs活性的影响;用双波长荧光分光光度法测定HUVECs细胞内游离钙离子浓度;检测各组内皮细胞匀浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;用ELISA法测定培养的细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)表达的变化;并测定细胞凋亡率。结果:①LPS作用后血管内皮细胞损伤明显,细胞增殖减少,细胞培养上清液和细胞匀浆中MDA含量、细胞内钙离子浓度和IL-6均升高,SOD、GSH-Px活性下降,凋亡率可达38.9±1.1%,均与正常对照组有统计学差异(P<0.01);②加入MLT可明显减轻LPS对抗氧化酶SOD、GSH-Px的影响,同时MDA含量、细胞内钙离子浓度和IL-6均明显下降,并显著减少凋亡细胞数量,各指标差异有统计学意义(P<0.01)。结论:褪黑素可保护和修复LPS引起的血管内皮细胞损伤,其作用途径可能与保护细胞的线粒体,提高了该细胞的抗氧化酶活性,降低细胞内钙离子浓度作用有关。