超顺磁性氧化铁微粒磁标记骨髓间充质干细胞效率实验研究

目的探讨不同浓度超微超顺磁性氧化铁微粒(USPIO)与多聚左旋赖氨酸(PLL)标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的磁标记效率及对细胞生长活力的影响,寻找最佳配比浓度。方法实验采用6周龄Wister近交系大鼠,150 g左右,雄性。用贴壁法分离培养BMSCs。使用6nm USPIO-PLL复合物标记BMSCs。实验分6组,对照组为未标记的BMSCs(A组)。按照PLL的有无及PLL质量浓度梯度(0、0.25、0.50、0.75、1.00μg/mL)分为5个实验组(B~F组);其中每个实验组再根据不同浓度铁离子与PLL结合(USPIO的终质量浓度分别为25、50、100、150μg/mL)。使用电子显微镜及光学显微镜观察标记后的BMSCs及BMSCs内的USPIO微粒。BMSCs活力测定采用台盼蓝排除实验。BMSCs生长曲线绘制采用MTT法。MRI观察体外标记后BMSCs的显影。火焰法测量BMSCs内铁含量,验证铁含量与MRI信号的关系。统计学分析采用方差分析。结果台盼蓝染色证实90%以上标记后BMSCs均拒染台盼蓝。根据BMSCs生长曲线判断单纯使用铁离子质量浓度达到200μg/mL时或PLL用量达1.00μg/mL会对BMSCs的生长产生一定的抑制作用。火焰法测得单独USPIO标记BMSCs与USPIO-PLL标记BMSCs铁含量差异有统计学意义(P<0.05)。T2WI及SWI序列图像从B组至F组信号强度逐级下降,反映出铁离子的变化情况。结论使用USPIO(100μg/mL)结合PLL(0.75μg/mL)标记BMSCs即对细胞活性和生长无不利影响,且标记BMSCs的信号强度较强。