TGF-β_1对小鼠表皮细胞生长动力学影响的研究

目的探讨离体培养条件下TGF-β_1对小鼠表皮细胞生长动力学的影响。方法分离培养c-57小鼠表皮细胞,以每孔5×10~4细胞接种于96孔板,培养72 h后,(1)加入不同浓度的TGF-β_1,观察其对表皮细胞生长的抑制作用;(2)加入不同浓度抑制剂SB431542,30 min后加入10μg/mL TGF-β_1,观察其对TGF-β_1的拮抗作用。以XTT法测定细胞增殖曲线。以BrdU标记,用DAKO-BrdUrd单克隆抗体共孵育,用荧光标记兔抗鼠二抗显色,用PI衬染,流式细胞仪分析,计算不同细胞周期比率和细胞周期时间。结果TGF-β_1可抑制小鼠表皮细胞的增殖,并有浓度依赖性,且作用时间越长,抑制作用越显著。SB431542能拮抗TGF-β_1对表皮细胞的抑制作用,且当10-5 mol/L时拮抗作用最强。流式细胞仪分析显示,用10μg/mL TGF-β_1作用52h后,G_0/G_1期细胞百分率显著增加(从47%增加到78%),BrdU阳性百分率下降95%,BrdU阳性细胞的下降与S期细胞下降平行。结论培养条件下TGF-β_1可以使小鼠表皮细胞生长停止于G_0/G_1期,具有抑制细胞增殖的作用。SB431542可以拮抗TGF-β_1对小鼠表皮细胞生长的抑制作用。