血管内皮生长因子过表达载体和干扰载体的构建及其对Lewis肺癌细胞的干预

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)过表达载体和干扰载体对Lewis肺癌细胞的干预作用。方法:构建VEGF过表达载体pIRES2-VEGF-GFP和干扰载体psiRNA-VEGF-GFP,脂质体法介导转染Lewis肺癌细胞;荧光显微镜观察细胞GFP蛋白的表达状态;MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞生长差异和细胞周期变化;Western-Blot检测细胞转染前后VEGF蛋白表达量的变化。结果:送检测序的质粒图谱正确,经转染Lewis肺癌细胞后建立了稳定表达模型;过表达VEGF组可见稳定的绿色荧光蛋白表达;过表达VEGF进入S期的细胞达到45.3%,未转染组为29.1%;干扰其表达后细胞的生长受阻,细胞周期阻滞在G0/G1期的比率达74.5%。过表达VEGF组VEGF蛋白的表达量约为未转染Lewis肺癌细胞的3倍;干扰VEGF表达后VEGF蛋白的表达下调。结论:本实验成功构建了VEGF过表达载体和干扰载体,并在Lewis肺癌细胞中建立了稳定表达模型,初步证实VEGF能够促进肺癌细胞恶性进展。