NF-κB在肝细胞生长因子介导的肝脏干细胞增殖效应中的作用

目的研究NF-κB途径在肝细胞生长因子(HGF)介导的肝脏WBF-344细胞增殖信号转导调控中的作用。方法用不同浓度的HGF(0,20,40,80,100ng/ml)刺激WBF-344细胞,24h后用3H-TdR掺入法检测细胞的增殖效应。采用脂质体转染方法用位点阴性的IκBα蛋白突变体质粒转染WBF-344细胞,阻断NF-κB活性。用HGF(40ng/ml)刺激0、15、30、60、120min后提取核蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)检测NF-κB的结合活性。采用脂质体转染法将NF-κB报告基因质粒BDGreatEscAPeTMSEAPvector瞬时转染WBF-344细胞后用不同浓度的HGF(0、10、20、40ng/ml)刺激8h,通过BDGreatEscAPeTMSEAP荧光检测系统检测NF-κB的转录活性。用NF-κB抑制剂如BAY-11-7082和ASA预处理WBF-344细胞,再用HGF(40ng/ml)刺激24h,通过3H掺入法检测细胞增殖效应。结果HGF具有促进WB-F344细胞增殖的作用,且呈剂量效应正相关趋势。HGF能够明显提高NF-κBDNA的结合活性,NF-κB复合物在HGF作用15min后即出现,并在30～60min时达到高峰,以后逐渐减退。HGF能够显著促进NF-κB的转录活性,呈剂量效应相关趋势。用NF-κB抑制剂BAY-11-7082或ASA阻断NF-κB后,HGF诱导的WBF-344细胞增殖能够被明显抑制;在转染NF-κB抑制质粒的细胞,HGF介导的WBF-344细胞增殖效应被完全阻断。结论HGF可促进WBF-344细胞增殖,且呈剂量效应正相关趋势。HGF介导的WBF-344细胞增殖效应依赖NF-κB的活化,NF-κB的激活对于HGF介导的WBF-344细胞增殖效应是必须的。