LAMP法检测乳粉中的阪崎肠杆菌

据WHO最新报告显示,乳粉中的阪崎肠杆菌是导致婴幼儿感染和死亡的主要原因之一.FDA于2002年公布了婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌检测的推荐方法,但检测周期长达1周左右,而目抹作复杂,难以满足控制该疾病暴发和传播的需要.DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是-种特异性、灵敏度高、检测时间短的新型基因扩增技术.本文以阪崎肠杆菌为研究对象,建立了一套应用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测方法.针对阪崎肠杆菌16s RNA基因设计4条引物特异性识别靶基因的六个特殊区域,并在63℃进行恒温扩增.实验结果表明,使用该方法能够在5h之内检测出复原乳样品中101 CFU/mL的阪崎肠杆菌.灵敏度可以达到100fg阪崎肠杆菌基因组DNA.应用环介导等温扩增法,克服了传统检测周期长、操作复杂的缺点,不仅能够用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的检测,而且满足了对于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测的迫切需要.