新型示踪MHC-Ⅰ类分子方法的建立

目的 采用位点特异性荧光蛋白标记技术建立新型示踪MHC-Ⅰ类分子的方法,比较TCtag和halotag在体细胞和抗原递呈细胞中示踪MHC-Ⅰ类分子的优缺点.方法 构建H-2Kb-TCtag和H-2Kb-halotag融合蛋白的真核慢病毒表达载体,转染293FT细胞制备病毒,将病毒分别感染体细胞293FT和树突状细胞系DC2.4细胞后,TCtag采用染料ReAsH和FlAsH染色,Halotag采用染料HaloTag(R)TMR染色,在激光共聚焦显微镜下观察H-2Kb的分布情况.结果 通过激光共聚焦显微镜观察发现:TCtag与染料ReAsH和FlAsH只在293FT细胞内是特异性的结合;Halotag与用染料HaloTag(R)TMR在293FT和DC2.4细胞内都是特异性结合的.结论 从结合特异性上来看,Halotag标记MHC Ⅰ类分子要优于TC-tag.