犬细小病毒环介导等温扩增检测方法的建立

根据GenBank中犬细小病毒(CPV)VP2基因序列,利用Primer Explorer V4软件设计并合成了针对CPV VP2基因序列保守区域的4条寡核苷酸片段(F3/B3,FIP/BIP)作为LAMP引物。以CPV DNA为模板,通过对LAMP反应温度和时间的优化以及特异性试验、敏感性试验和对临床样品的检测,建立了一种针对CPV VP2基因的LAMP快速检测方法。结果显示,该LAMP检测方法只对CPV有梯状扩增条带,对犬瘟热病毒(CDV)、狂犬病病毒(RV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV-Ⅱ)无扩增条带;对CPV的最低检出量为2.1×10-2 TCID50,其敏感性约为常规PCR检测方法(最低检出量为2.1TCID50)的100倍,是犬细小病毒抗原快速检测试纸(最低检出量为101.5 TCID50)的1 500倍。临床样品的LAMP检测结果与PCR检测结果的符合率为100%。