人感染高致病性禽流感病毒H5N1核酸检测方法的建立及应用

目的建立人感染高致病性禽流感病毒H5N1的核酸检测方法,用于人感染高致病性禽流感病毒疑似病例临床标本的检测。方法针对甲型流感病毒保守基因M设计RT-PCR和real-timePCR引物检测是否为甲型流感病毒,同时针对H5N1禽流感病毒设计针对H5和N1基因的特异性RT-PCR和real-timePCR引物作亚型检测,建立禽流感H5N1病毒RT-PCR和real-timePCR检测方法。结果本研究建立的RT-PCR和real-timePCR方法可以特异性地检测H5N1病毒,并且与人流感病毒H1、H3没有交叉反应。RT-PCR检测方法灵敏度可到1TCID50,real-timePCR灵敏度可达0·01TCID50。利用上述方法检测人感染高致病性禽流感病毒H5N1疑似病例临床标本,从42例不明原因肺炎病例中检测出阳性标本13例。结论本研究建立的RT-PCR和real-timePCR方法可以用于人感染高致病性禽流感病毒H5N1临床标本的实验室检测。