活化Notch2信号促进高糖条件下破骨细胞分化的体外研究

目的探讨活化Notch2信号对高糖条件下核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导破骨细胞分化的影响,初步明确Notch2信号在高糖条件下破骨细胞分化中的作用。方法体外培养小鼠破骨前体细胞,在高糖条件下采用RANKL刺激破骨前体细胞。实验分为葡萄糖和甘露醇等渗对照组,每组设5个浓度(0、5、10、20、40 mmol·L-1),通过实时定量聚合酶链反应检测Notch2基因的表达水平,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞分化情况。构建含Notch2细胞内片段(ICN2)的病毒载体(pMX-ICN2),转染包装细胞,收获病毒上清液感染破骨前体细胞;将病毒载体分为ICN2-OE(ICN2过表达)和EMPTY(仅感染pMX载体)两组,通过蛋白质印迹法检测ICN2蛋白的表达水平;并在高糖条件下(20、40 mmol·L-1)用RANKL刺激ICN2-OE和EMPTY组,设甘露醇等渗对照组,用TRAP染色检测破骨细胞分化情况。结果 RANKL诱导破骨细胞分化过程中,葡萄糖浓度为20、40 mmol·L-1时,破骨细胞数分别为110.3±6.8和72.0±8.0,Notch2相对表达量分别为1.65±0.23和1.10±0.11;20、40 mmol·L-1甘露醇组的破骨细胞数分别为152.7±7.0和157.0±12.5,Notch2相对表达量分别为2.82±0.28和2.42±0.27,组间差异有统计学意义(P<0.05)。活化Notch2信号后,葡萄糖浓度为20、40 mmol·L-1时,ICN2-OE组破骨细胞数分别为206.7±7.8和178.3±11.5,EMPTY组分别为102.3±8.7和76.0±10.1,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论活化Notch2信号可促进高糖条件下破骨细胞的分化。