华支睾吸虫乳酸脱氢酶E10-20及E94-102表位的克隆表达与生物学特性初步研究

[目的]原核克隆及表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)两个表位aa10-20(E10-20)及aa94-102(E94-102),初步研究两表位与CsLDH免疫学及酶学相互关系.[方法]将E10-20及E94-102克隆至pGEX-4T-1载体,表达纯化重组蛋白,用Western Blotting和间接ELISA法检测CsLDH免疫血清对表位霞组蛋白的识别,同时检测两表位重组蛋白的免疫血清对CsLDH蛋白的识别;利用CsLDH标准酶活性反应体系.比较两表位免疫血清与CsLDH免疫血清对CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸反应的影响.[结果]成功构建pGEX-4T-1-E1010-20及pGEX-4T-1-E94-10重组质粒,SDS.PAGE鉴定表达的重组蛋白,菌体裂解液经亲和层析纯化,获得与GST融合表达的蛋白E10-20及E94-102.两表位重组蛋白均可被CsLDH免疫血清识别,而对E94-10更易于识别;重组CsLDH也能被E10-20及E94-102免疫血清识别,而不能被对照血清识别.E94-10免疫血清能抑制CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸的反应.[结论]表位结构和功能研究深化了对CsLDH结构的理解,并为开辟CsLDH疫苗研究新路径奠定基础.