东莞大蕉超表达拟南芥GBF1基因及其抗寒性检测

[目的]研究超表达拟南芥CBF1基因(AtCBF1)对大蕉抗寒性的影响,为从大蕉克隆抗寒相关基因奠定基础.[方法]采用农杆菌介导法转化东莞大蕉的胚性细胞悬浮系,获得转AtCBF1基因的大蕉植株；利用GUS组织染色、PCR、RT-PCR以及RT-qPCR对转基因植株进行鉴定；比较低温处理后的转基因株系和对照的冷害特征以及超氧化物歧化酶( SOD)活性和丙二醛(MDA)含量等生理生化指标,鉴定转基因大蕉植株的抗寒能力.[结果]试验共获得6个抗性再生转化系.GUS组织染色结果表明,除T1外,其余均为阳性；PCR鉴定结果表明,AtCBF1在6个抗性再生转化系均为阳性,而GUS基因在T1转化系中没有检测出;RT-PCR结果表明,AtCBF1在6个转化系均得到表达,对T1、T2和T3 3个转化系进行RT-qPCR检测发现,AtCBF1基因在3个转基因株系表达水平存在差异；在低温处理下,转基因植株的叶片相对电导率、MDA的累积都低于非转基因植株,而SOD总活性高于对照；低温处理条件下,转基因植株叶片的冷害症状明显轻于对照.[结论]At CBF1在大蕉中超表达,具有增强大蕉SOD活性,降低因低温导致的MDA含量和离子渗漏率,缓解质膜过氧程度,进而改善大蕉植株抗低温胁迫的能力.