产志贺毒素Ⅱ型变异体大肠杆菌LAMP检测方法的建立

为建立产志贺毒素Ⅱ型变异体(Stx2e)大肠杆菌的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法,参照GenBank中12条Stx2e序列和9条Stx2序列,针对Stx2e基因保守区域设计并合成4条引物,分别进行了反应条件优化、特异性试验、敏感性试验及模拟样品检测.结果显示,用所建立的LAMP方法对阳性样品扩增所得产物电泳后呈特征性梯状条带,阴性样品的扩增产物电泳后均无扩增条带.建立的LAMP方法对Stx2e+大肠杆菌的最低检出量为38 CFU/管,敏感性高于PCR方法(3.8×103CFU/管).LAMP和PCR对模拟样品检测结果的符合率为100%.该研究为仔猪水肿病的诊断和Stx2e+大肠杆菌的快速检测提供了新的方法.