哈萨克族食管癌中人乳头状瘤病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的建立检测哈萨克族食管癌石蜡样本中HPV16/18(human papillomavirus 16/18,HPV16/18)病毒载量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)方法,并探讨病毒载量与食管癌病理分级的相关性。方法分别构建HPV16/18和内参基因β-actin的重组质粒,制备质粒标准品;确定最佳实验条件,建立高灵敏度的qRT-PCR方法,并对103例经病理学确诊的哈萨克族食管癌石蜡包埋组织提取DNA后,进行HPV16/18载量的检测,分析其载量与哈萨克族食管癌病理分级的相关性。结果建立了HPV16/18和β-actin标准曲线,HPV16/18和β-actin标准品Ct值与其相应梯度稀释标准品浓度呈良好线性关系r,2>0.990,扩增效率分别为85.3%～105.0%,经溶解曲线分析产物特异。103例哈萨克族食管癌样中HPV16的检出率为18.3%,并有3例合并混合HPV18感染;其中HPV16的病毒载量在哈萨克族食管癌转移组中是未转移组中的1.35倍。结论成功建立了灵敏度较高的检测HPV16/18病毒载量的实时荧光定量PCR方法。HPV16/18感染是哈萨克族食管癌发生发展的因素之一,但其病毒载量与恶性程度相关性不显著。